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中国药典<9205>微生物洁净实验室的监控及分析应用分享

2019-06-20 分类:原创文章 作者: 来源:CIMI 浏览:
作者:广州市药品检验所/ 陈伟盛
编辑:北京中仑工业微生物研究院
版权:原创文章,独家版权

编者按:环境监测一直是微生物控制的重点和难点!2020年版《中国药典》9205 药品洁净实验室微生物监测和控制指导原则进行了较大篇幅的修订,表明洁净室的微生物监控持续受到监管部门的重视,同时对于环境监控的认识也在不断的深入和趋于科学。环境监控背后有着丰富多样的法规基础和科学依据,如:表面菌采样如何进行、A级区风速如何定义、微生物标准如何判读、趋势分析的统计学依据有哪些等等?这些都是微生物监控中长期困扰我们的话题。今天,广州市药品检验所微生物室陈伟盛给读者带来微生物监控的深入解析。
 
 
  前言
  对于微生物洁净室的监控,相信大家都不会陌生,在这里笔者主要是分享一下在使用<9205>洁净室监控中所遇到的一些疑问与疑惑以及在洁净室监控中的一些经验。
 
  对于洁净室的监控,首要问题是如何合规合法,然后再做到合理合用,对于洁净室的监控标准比较多,而且也比较复杂,对于药品微生物检验用的洁净室,主要的参考标准就是《中国药典》<9205>药品洁净实验室微生物监测和控制指导原则。然而<9205>的很多监测方法是引用相关的标准,所以在<9205>中就没有详细表述,在这里就与大家分享一下可能被忽略的问题数据分析经验

 
  一、表面菌监测
  在《中国药典》<9205>中,洁净室需要进行表面微生物的监测,并且明确要求“表面菌测定应在实验结束后进行”,但是笔者发现一个问题,在<9205>中所列举的标准中,并没有发现表面微生物的具体操作方式,只有采样面积是25cm2
 
  其实对于表面微生物的监测,暂时没有专门针对医药工业的国家标准,只能参考其他相关标准制定操作规程,虽然在<9205>中规定了表面微生物的采样单位面积是25cm2,但是对于接触平皿的具体采样细节并没有做出具体规定,如平皿采样时间与采样压力等。在这里笔者建议可以参考ISO14644进行,在ISO14644中有一些相关的描述“使用接触盘的水平采样点的理想方法如下:培养基表面应与采样点接触不少于10s,向整个接触表面施加恒定均匀的压力(如施加的质量约为 25g/cm2),不得有环形或线性运动。装置有接触并拿开后,要加盖并尽快用适当的培养条件培养。”这样我们就可以在实验室制定相关的操作规程,可以更加规范实验的表面微生物的检测采样,使数据更加可靠。
 
 
  二、<9205>表1中设备与设施的区别
  在9205的表1中,对于A级的空气流速(平均风速),有两个不同规定:0.25~0.50m/s(设备);0.36~0.54m/s(设施)。但是在中国药典<9205>中并没有给出设备与设施的定义,那在我们进行A级洁净度验收的时候,对与这项物理参数应如何进行选择?
 
 
  在这里笔者也曾经迷惑过,为了更好的解析这个问题,笔者先从限度的法规出处说起。在GMP(2010版)无菌附录第九条中写道:“A级:……单向流系统在其工作区域必须均匀送风,风速为0.36~0.54m/s(指导值)。……在密闭的隔离操作器或手套箱内,可以使用较低的风速。”,这句话可以说明当操作区域具有有效的隔离屏障时,能有效隔离外源污染,就可以适当的降低风速(也就是表1中的设施风速0.25~0.50m/s)。
 
  所以笔者认为
  在区分设备与设施时,主要是看该A级环境是否具有有效的隔离屏障,只要该A级环境有有效的隔离屏障的(如带屏蔽门的安全柜与洁净台),就可以参照表1的设备进行验收与监控,否则就需要参照设施的参数进行验收与监控。
 
 
  三、<9205>表4中动态标准的平均值的理解
  根据表4的注释1,标准的限度值是平均值,那具体是怎么样的平均值呢,笔者在这里给大家举个例子。
 
 
  在某次A级浮游菌监测中,对该区域进行空气采样,采样点为3个,每个采样点取样两次,经过培养后结果见下表,对该区域,我们应该采用哪个平均值进行判定呢?到底该区域是否符合9205表4 A级的要求呢?
 

 
  在这里笔者又一次从相关的标准出处说起,与浮游菌监测相关的标准是GB/T 16293《医药工业净室(区)浮游菌的测试方法》,在国标中结果计算是这样规定的“5.6.2 每个测点的浮游菌平均浓度计算:菌落数/采样量。”,也就是说上表中的平均值1就是每个测点的浮游菌平均浓度,然后在看看标准中结果评定的描述“5.7.1 每个测点的浮游菌平均浓度必须低于所选定评定标准中的界限。”,大家看标准看到这里应该很清楚了,上表中的平均值是平均值1,该表的A级监测结果是不符合规定的,也就是说<9205>表4的注释1中的平均值是指单一测定的平均值,而不是多个测定点的平均值。
 
  (PS:对沉降菌与表面微生物标准中同样有相关的规定,对平均值的理解与浮游菌一致。)
 
 
  四、环境数据分析的经验分享
  在<9205>中要求完成监控外,还需要进行数据分析,要求“通过收集的数据和趋势分析,总结与评估洁净室实验室是是否受控”,这个我相信也是大家最大的问题,因为如何进行趋势分析,目前没有相关的标准,能运用的分析工具虽然多,但是大多是统计工具,不知道如何选择,所以在这就分享一下笔者的一些经验与心得。
 
  要进行趋势分析,首先要了解监控数据的统计学分布,在开始的时候,大家都认为监控的数据符合一个已知的分布,如正态分布或泊松分布等(PS:在旧版的ISO14644中也有提到),但是在新版ISO14644中,对悬浮粒子的分布取消了95%置信限的计算,原因也在标准中进行了说明:在长期的实验中发现,粒子不一定服从一个已知的分布。所以在趋势分析中,笔者认为应该选择不需要知道数据分布的统计工具,也就是非参检验(如Man-Kendall检验,Cox-Stuart检验,卡方检验等)。在这里,笔者利用洁净室的数据进行具体分享。
 
(PS:监控区域均为无菌背景区,全部按B级监控)
 
  上表是洁净室的浮游菌监控结果,对于上述结果,从图表发现,无菌2有一次监控限度达到了限度值,那我们如何对上述情况进行趋势分析,如何判断洁净环境是否有超限的趋势,以及上升的趋势,在这里笔者采用Cox-Stuart检验来了进行(PS:由于Cox-Stuart检验的中间计算过程比较,在这里就没有详细列出,大家也可以使用统计软件完成),通过统计发现P均小于0.05,说明对于超限这个假设在95%的概率上是不显著的,可以认为是不会发生的。
 
表:浮游菌统计结果
 
  浮游菌结果没有超限的趋势,但是是否有上升的趋势呢?接下来,我们再次采用Cox-Stuart检验,判断浮游菌结果是否有上升趋势。从结果中可以发现其P值均大于0.05,说明这三个区域的各项静态指标趋于平稳,无变化趋势。
 
表:浮游菌趋势分析
 
  最后通过数据分析,可以认为该区域的浮游菌监控数据不存在超限风险,趋势也是平稳的没有上升趋势,可以认为洁净区的浮游菌数据比较稳定,控制措施有效。
 
  其实趋势分析并没有强制要求使用什么样的工具,大家可以根据自己的实际情况选择分析方法,笔者只是在这分享自己的一些经验,希望可以对大家在进行趋势分析的时候有所帮助。
 
 
  最后,希望通过这次分享,能使大家对《中国药典》<9205>有一个更加深入的了解,对洁净室的监控可以进行更加深入的研究,在洁净室的监测、控制与分析中有更大帮助,把洁净室的风险把控起来,提前做好有效的预防措施,真正达到<9205>的目的“使受控环境维持可接受的微生物污染风险水平”。

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