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精细解读 | 国家药典委员会第五批公示的《中国药典》2020年版四部通则增修订内容

2019-01-30 分类:原创文章 作者:Array 来源:中仑研究院 浏览:
作者:雨花石
编辑:北京中仑工业微生物研究院
版权:原创文章,独家版权

编者按:国家药典委员会于2019年1月23日在官网发布了关于《中国药典》2020年版四部通则增修订内容(第五批)的公示,共7个征求意见稿。与第一次征求意见稿相比,第二次征求意见稿新增了新的修订内容。北京中仑工业微生物研究院第一时间为您带来精细解读。
备注:本解读目的只为制药业同仁能清晰了解修订内容做参考之用,其观点谨代表笔者!

 
征求意见稿目录
 
  1101- 无菌检查法(第二次征求意见稿)
  9204-微生物鉴定指导原则(第二次征求意见稿)
  9206 无菌检查用隔离系统验证和应用指导原则(第二次征求意见稿)
  9205 -药品洁净实验室微生物监测和控制指导原则(第二次征求意见稿)
  灭菌用生物指示剂指导原则(新增)(第二次征求意见稿)
  生物指示剂耐受性检查法指导原则(第二次征求意见稿)
  细菌DNA特征序列鉴定法(新增)(第二次征求意见稿)

 
  一、1101- 无菌检查法(第二次征求意见稿)
  1、删除了“制备好的培养基应保存在2~25℃、避光的环境,若保存于非密闭容器中,一般在3周内使用;若保存于密闭容器中,一般可在一年内使用”,修订为“若不即时使用,应置于无菌密闭容器中,在 2~25℃、避光的环境下保存,并在经验证的保存期内使用。”
  内容解读
  欧美药典均未明确规定制备好的培养基储存有效期,而《中国药典》当前及以前的版本一直有着明确的规定,且未描述可以基于验证的结果规定有效期。此次征求意见稿的描述更加合理。不过,对于制药企业来说,今后培养基有效期的制定依据无药典可直接引用,须根据验证的结果确定。

  2、黑曲霉孢子溶液制备的培养条件,由“20~25℃培养5~7天”修订为“20~25℃培养5~7天,或直到获得丰富的孢子”。
  内容解读
  在北京中仑工业微生物研究院举办的培训班中,不少学员反映黑曲霉在培养时,到了7天仍未变色,无法顺利制得孢子。此次修订,黑曲霉培养时间的规定更为灵活,企业可根据实际情况延长培养时间,直至获得丰富的孢子。笔者根据个人经验,黑曲霉的培养需要潮湿和氧气。同一黑曲霉菌株,同一培养基,如采用平板培养,则3天左右即开始出现孢子,而如果采用试管培养,则需要至5-7天或更长的培养时间才可以获得孢子,个别情况,甚至培养10天以上仍无孢子形成。这种情况,笔者建议在培养过程适当的打开塞子通通氧气,并确认培养基是否失水。
 
  3、培养基灵敏度检查中,现行版药典规定,FTM的装量为12mL, TSB的装量为9mL,接种相应菌株后,培养,逐日观察结果。此次征求意见稿中,FTM和TSB的装量均修订为适宜装量,且取消了“逐日观察结果”的规定。
  内容解读
  此次修订,对于培养基的装量不再做统一规定,而是适宜装量,企业根据实际情况,(如自配还是商业化的培养基)以及检验方法,选择适宜的装量进行灵敏度检查。而“逐日观察结果”的取消,则更为合理,对于灵敏度检查而言,在规定的时间内生长良好即可,无需每天观察。
  另外,在第一次征求意见稿中,无菌检查的14天培养中,不再要求逐日观察,而是修订为定期观察,与欧美药典保持了一致。这一修订,既合情又合理。微生物实验室可以不用在周末的时候安排员工观察无菌检查的结果,既可以减少不必要的工作,又可避免数据完整性的风险。

  4、薄膜过滤法中,在进行无菌检查时,“应先将少量的冲洗液过滤,以润湿膜”修订为“一般应先将少量的冲洗液过滤,以润湿膜”。
  内容解读
  先用少量的冲洗液润湿滤膜,可有效的减少滤膜对产品的吸附,对抑菌性的消除有着积极的作用。然而,这一规定不应强制,可根据产品特性选择。

  5、无菌检查的培养天数,由“培养14天”修订为“培养不少于14天”。
  内容解读
  本次修订培养时间的规定更为合理。

  6、无菌检查中,表3,每支供试品接入每种培养基的最少量:
  液体制剂中

  “V≤1 ml,全量”修订为“V<1ml,全量”;
  “1ml<V≤40 ml,半量,但不得少于1ml”修订为“1ml≤V≤40 ml,半量,但不得少于1ml”
  固体制剂中
  “300mg≤M<5g, 150mg”修订为“300mg≤M≤5g, 150mg”;“M≥5g,500mg”修订为“M>5g,500mg”
  内容解读
  此处修订没有大的影响,比如装量为1ml的液体制剂,按照现行版药典,每种培养基的接种量为全量,则每批无菌检查,至少需要60支样品(按照通常的生产批量计算,包括阳性对照);按照此次征求意见稿,每种培养基看似可以做半量,但是又有不得少于1ml的规定,因此,该规格接种至每种培养基的,仍然是全量,检验数量也就不会有变化。
 
  二、9204-微生物鉴定指导原则(第二次征求意见稿)
  1、基因型微生物鉴定中,表 2 微生物分类学的基因型 /系统发育的特征中,“16S rRNA序列”修订为“16S rRNA基因序列”。
  内容解读
  此处修订描述更加准确,鉴定方法是对16S rRNA的基因序列进行测序,而非直接对16S  rRNA序列进行测序。

  2、微生物鉴定方法的确认,准确性、重现性等确认指标,均加上百分率(%)。
  内容解读
  本次修订描述更加准确。

  三、9206 无菌检查用隔离系统验证和应用指导原则(第二次征求意见稿)
  1、文中的“灭菌”修改为“表面灭菌”。
  内容解读
  描述更加准确,隔离器的灭菌主要是针对表面的灭菌。
 
  2、引言中,“验证”修改为“确认”,并加入了“监测”。
  内容解读
  描述更加准确,隔离器为设备,一般用“确认”而非“验证”。
 
  3、无菌检查用隔离系统的结构-灭菌设备中,“灭菌剂应通过高效空气过滤器”修改为“灭菌剂应通过有效过滤后”。
  内容解读
  本次修订描述得更加准确。
 
  4、文中部分“手套”修改为“手套-袖套组件”。
  内容解读
  本次修订描述得更加准确。
 
  5、隔离系统运行确认中,手套的检漏方法由“采用手套检漏仪”修改为““采用手套检漏仪”或其他经过验证的方法。
  内容解读
  本次修订描述得更加准确、完整。
 
  6、隔离系统运行确认-气流中,增加了“此外,在灭菌剂排出阶段适当的风速和换气次数可改善排残效果”;“确认舱体内部的气流流型,应当能够证明所用气流方式不会导致污染风险”修改为“确认舱体内部的气流流型。气流流型测试可用于确认灭菌剂的分布情况。”
  内容解读
  增加的内容,描述了如何改善灭菌剂的排出,以降低灭菌剂的残留。修改的内容,描述更加准确。

  7、性能确认-表面灭菌效果确认中,灭菌效果由生物指示剂下降6个对数值,修改为下降3-6个对数值;删除了“灭菌程序的确定要经过三次连续的验证且能使生物指示剂下降达到或超过6个对数值”。
  内容解读
  USP规定生物指示剂的杀灭效果不低于3个对数值,PIC/S建议下降6个对数值但不强制。因此,此次修订与国外标准基本保持一致。删除的内容,则不再明确要求进行连续三次的灭菌程序验证。

  四、9205 -药品洁净实验室微生物监测和控制指导原则(第二次征求意见稿)
  1、在确认章节中,增加了“测试应在模拟正常检测条件下进行 ”
  内容解读
  关于洁净实验室物理参数的测试,强调应在模拟正常检测条件下进行,重点是强调物理参数的测试,可以反应洁净实验室实际操作时的状况。
 
  2、在监测章节中,“当洁净区有超净工作台、空气调节系统等关键设备发生重大改变时应重新进行监测”修订为“当洁净区有超净工作台、空气调节系统等关键设备发生重大改变时应重新进行验证”,并删除了“当微生物监测结果或样品测定产结果产生偏离,经评估洁净区可能存在被污染的风险时,应对洁净区进行清消毒后重新进行监测 。”
  内容解读
  对于重大变更,仅进行监测是不够的。而删除的部分,在监测结果或者样品测定结果异常时,应根据实际情况作出相应的措施。

  3、在监测频次及项目中,当监测结果超出警戒限或纠偏限,或其状况反映出倾向性的数据时,应“考虑修改监测频次”修改为“重新评估监测程序的合理性”。
  内容解读
  环境出现异常趋势,很多情况下是环境控制出了问题,而非环境监测程序有问题。相反,环境监测程序可以发现异常趋势,证明监测程序本身有合理性,在环境异常时可以监测得出来。当然,药典中提到的某些变更,如区域分布的重大变动,需要重新评估监测程序的合理性。

  4、微生物监测标准,“表中各数值均为各个取样点的平均值”修改为“表中各数值均为各个取样点的测定值”;增加了“如果试验时间少于4小时,则仍应使用表中的限度”。
  内容解读
  微生物监测结果,大多企业均是确保每个取样点的结果均应符合规定。对于新增的内容,表格中未有标号③与之对应,根据内容,推测为沉降菌。关于试验时间少于4小时,仍使用表格中的限度,笔者认为应视情况而定:如监测时间已覆盖整个实验操作过程,可直接使用表中的限度,否则,不应直接使用。比如,某次实验操作过程为2小时,实际监测2小时,可使用表中的限度;而如果分析人员实际只监测了半小时,却直接使用表中的限度,则不太合理。
 
  5、警戒限和纠偏限中,删除了“③A级环境的样品,正常情况下应无微生物污染。”
  内容解读
  A级环境的监控,<1其实是要求不得有菌生长。

  6、数据分析及偏差处理,“应正确评估微生物污染,不仅关注微生物数量”修订为“应正确评估微生物污染,不仅关注微生物数量和种类”。
  内容解读
  环境监测的数据分析,微生物种类的分析是一项非常重要的内容。

  五、灭菌用生物指示剂指导原则(新增)(第二次征求意见稿)
  1、生物指示剂的分类中,灭菌介质删除了过滤。
  内容解读
  过滤除菌不属于通常意义上的灭菌范畴,因过滤工艺非杀灭微生物,只是将微生物从产品中分离去除。
 
  2、生物指示剂的分类中,芽孢悬液生物指示剂,建议测定芽孢数、D值和Z值,修订后,删除了Z值测定的要求。
  内容解读
  除芽孢悬液生物指示剂外,其他两类形式的指示剂均未提到测试的要求。而对于测试项目,删除Z值,不知出于何考虑。(注:湿热灭菌,ISO11138和FDA 510(k)均有Z值的要求)。

  3、生物指示剂的制备,删除了耐受性中的Z值,以及商业化生物指示剂耐受稳定性的要求。
  内容解读
  关于Z值的删除,存在疑问,理由同解读2。
 
  4、生物指示剂的使用,干热灭菌法的生物指示剂由“枯草芽胞杆菌生物指示剂(Bacillus subtilis)”修订为“萎缩芽孢杆菌生物指示剂(Bacillus atrophaeus)”。
  内容解读
  同期发布的1421灭菌法征求意见稿中,干热灭菌依然保留了枯草芽孢杆菌指示剂(Bacillus subtilis),希望药典各章节之间保持一致。

  5、生物指示剂的选择,标题“表 1. 商业化生物指示剂的典型特征”修改为“表 1. 商业化生物指示剂的典型特征实例”,同时删除了表格中的“经典D值(min)”一列,及将D值范围和耐受性的表头的描述分别修改为“D值的参考范围(min)”和“耐受性(一定条件下测定的D值,min)”。表格中,前述原因,“枯草芽胞杆菌生物指示剂(Bacillus subtilis)”修订为“萎缩芽孢杆菌生物指示剂(Bacillus atrophaeus)”。
  内容解读
  此处修订主要是删除了“经典D值(min)”一列。不同批次的生物指示剂D值会有差异,删除这一列,可避免被错误的解读。

  六、生物指示剂耐受性检查法指导原则(第二次征求意见稿)
  1、总芽胞计数中,纸载式生物指示剂的测试数量,由不少于3个修改为不少于4个。
  内容解读
  此处修订与USP <55>保持了一致,也是生物指示剂生产商建议的测试方法。

  2、总芽胞计数法中,计数方法在第一版征求意见稿中为单一的倾注平皿法,第二版征求意见稿中增加了平板涂布法,并增加了详细的操作步骤。
  内容解读
  计数方法不限于单一的倾注平皿法,具有更多的灵活性。

  3、表 1 生物指示剂的芽胞计数的试验条件,增加了“注:芽胞计数亦可按照经验证的试验条件试验”。
  内容解读
  该修订更为合理,只要计数方法经过验证,结果符合要求,亦可用于芽胞的计数。

  4、存活时间和杀灭时间的确认中,存活时间中,“使所有生物指示剂培养均呈阳性”修订为“使所有生物指示剂培养结果均为阳性”;杀灭时间中“使所有生物指示剂培养均呈阴性”修订为“使所有生物指示剂培养结果均为阴性”。
  内容解读
  描述更加准确。

  七、细菌DNA特征序列鉴定法(新增)(第二次征求意见稿)
  1、实验环境和仪器的一般要求中,“紫外分光光度仪”修改为“DNA定量仪器(如紫外分光光度仪)”
  内容解读
  描述更为准确,紫外分光光度法是DNA定量测定的常用方法,非唯一方法。

  2、试剂及其制备方法中,TE缓冲液的中文名称由“三羟甲基氨基甲烷-乙二胺四乙酸钠缓冲液”修改为“三羟甲基氨基甲烷-乙二胺四乙酸二钠缓冲液”;TE缓冲液和PCR反应缓冲液的灭菌条件由“121℃ 灭菌 15 分钟”修改为“灭菌”;删除了“采用试剂盒时, 应按照说明书操作,并符合试剂盒说明书中的质量控制要求及方法适用性要求” 。
  内容解读
  TE缓冲液的名称是一个纠正;缓冲液需要灭菌,而灭菌条件不一定限于规定的灭菌条件,只要达到灭菌效果,灭菌工艺即可用于缓冲液的灭菌;删除的内容,属于试剂盒的操作和质量控制,按照说明书操作和质量控制,属于良好的操作规范,非药典强制规定的内容。
 
  3、核酸提取和核酸扩增产物的纯化中,“4℃冰箱”修改为“2-8℃冰箱”。
  内容解读
  描述更为准确。  

  4、核酸提取中,“待检菌提取的核酸质量应能满足核酸扩增的要求。采用紫外分光光度法测定模板DNA的浓度和纯度,应能够满足后续试验的要求,核酸浓度宜不低于10 ng/μl,A260/A280比值宜在1.8~2.0之间。”修改为“待检菌提取的核酸质量应能满足核酸扩增的要求,核酸浓度宜不低于10 ng/μl。模板DNA浓度和纯度测定常用紫外分光光度法,A260/A280比值宜在1.8~2.0之间。”
  内容解读
  在实验环境和仪器的一般要求中,DNA定量测定法已不仅仅限于紫外分光光度法,此处内容作相应的调整。

  总结
  相对于第一次征求意见稿而言,第二次征求意见稿各章节的修订与描述更为准确、方法更为合理,在科学性和实践性上都有着很大的改进。
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