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浅谈微生物实验室常用的灭菌质量监测方法

2019-10-24 分类:原创文章 作者: 来源:中仑研究院 浏览:
作者:广东省药品检验所 林铁豪
编辑:北京中仑工业微生物研究院
版权:原创文章,独家版权
 
  编者按:北京中仑工业微生物研究院特邀广东省药品检验所微生物室林铁豪博士,对微生物实验室常用的灭菌质量监测方法进行分析阐述,帮助业内同仁在实际工作中采用理想、科学、实用的灭菌效能监测的方法,从而兼顾检验成本和工作效率。


  灭菌是指用适当的物理或化学手段将物品中活的微生物杀灭或除去,它能为微生物检验工作提供无菌的培养基和器皿,能将检验过程中产生的有害废弃物消毒,保障检验工作安全正常的进行。压力蒸汽灭菌法和干热灭菌法是微生物实验室最常用也最可靠的灭菌方法,灭菌参数监测是保证物品灭菌质量的重要保障。2020年版《中国药典》9203 微生物实验室质量管理指导原则征求意见稿中对于培养箱、冰箱、高灭菌锅等影响实验准确性的关键设备应在其运行过程中对关键参数(如温度、压力)进行连续观测和记录,有条件的情况下尽量使用自动记录装置。所以,微生物实验室应该制定完善的监测制度,以确保消毒灭菌物品的灭菌质量,保障检验工作的顺利进行。
 
  常用的灭菌质量监测方法
  灭菌效果监测方法是伴随灭菌方法的发展而出现的保证措施,它能够客观地反映灭菌效果,目前,国内外多数国家都已把灭菌效果监测方法载入药典、医疗技术规范及学术专著,并向科学化、标准化和法规化方向发展。
 
  目前,用于灭菌效果的监测主要有物理(工艺)监测化学监测生物监测3种方法。
 
  1、物理监测(工艺监测)
  使用机械监测器进行监测并记录每次灭菌时的温度、压力和时间等灭菌参数。包括在线温度压力检测及离线探头温度压力检测。此外,除了对灭菌时间-温度进行控制之外,还可以增加F0值(the physical measurements correspond to the expected time-temperature values or F0)控制方式。
 

  2、化学监测
  是利用化学指示剂(指示杀菌因子的强度和作用时间是否符合灭菌处理要求的制品)在一定温度与作用时间条件下受热变色或变形的特点,以判断是否达到灭菌所需的参数。在日常监测中,由于生物监测成本较高,出结果延迟,且灭菌锅每次运行的状态、蒸汽的质量、水电等外部条件均不可能达到完全一致,因此即使每台灭菌锅每日都行生物监测,也不能表明未进行生物监测的其余锅次都能符合灭菌条件。因而,化学监测的结果成为日常灭菌条件是否符合要求最为重要的依据,此法属于日常监测。
 
  化学监测作为压力蒸汽灭菌器和干热灭菌器日常监测的一项常规内容,其重要性不可或缺,但目前化学指示剂种类繁多,其监测意义不同。微生物室常用的有3M化学指示卡和3M化学指示胶带两种。
 
  化学指示卡一般都是采用印刷的方式将化学指示剂附着片上,使用时化学指示剂经常会与被监测物品直接接触,容易受到被监测物品在灭菌时所产生的冷凝水影响,影响灭菌变色。
 
  压力蒸汽灭菌化学指示胶带作为压力蒸汽灭菌效果的参考,它快捷、简单、较生物监测时间短、费用低,每灭菌批次的物品化学指示胶带是否均匀变色为该批次灭菌物品的正常灭菌提供重要依据,但它只能表明是否经过灭菌过程,单独使用化学指示胶带的情况下,灭菌锅是否正常运行还需进行定期的生物监控。
 
  在同等灭菌条件过程中,由于不同类型的化学指示剂监测灭菌条件是否符合的结果存在着非同步性,故单凭一项监测结果判断灭菌合格,作为无菌物品放行的指标存在着一定的安全风险。有条件的情况下,在一次灭菌过程中,采用多种化学指示剂作为日常灭菌符合条件的化学监测,对于灭菌产品的安全性有较大意义。
 

  3、生物监测
  2020年版《中国药典》新增9207灭菌用生物指示剂指导原则,生物指示剂是一种对特定灭菌程序有确定及稳定耐受性的特殊微生物制成品,可用于灭菌设备的性能确认等。
 
  目前常用的生物指示剂有菌片式生物指示剂(菌片条)、自含式生物指示剂和快速生物指示剂。菌片式生物指示剂是传统生物指示剂,自含式生物指示剂与菌片式生物指示剂相比它具有操作方便,培养时间短,但价格较菌片式生物指示剂高。
 

  灭菌时生物监测包应分别放在灭菌器的上中下层的前中后各一个点,采用自含式生物指示剂时,灭菌后与阳性管在56℃温箱中培养48小时对照,培养基由紫色变黄色为阳性,即灭菌失败;若培养基颜色不变为阴性,即灭菌成功。
 

 
  目前,对生物指示剂的质量控制主要参考usp<55> Biological indicators-resistance performance tests. 及ISO11138-1:2017 Sterilization of health care products-biological indicators。其中对D值测定主要是阴性分数法及残存曲线法,两种方法在实验操作特点、测试所需样品数量及测试结果上均有区别。此外,利用生物指示剂进行灭菌工艺验证还需要考虑生物指示剂在不同料液中耐受性的比较。
 
  生物监测应定期进行。生物监测不合格时应立即将上次生物监测合格以来的所有尚未使用的灭菌物品作重新灭菌处理,并分析和查找不合格原因,作好纪录。改进后,生物监测连续3次合格后,方可重新投入使用。灭菌质量监测记录应保留适当的时间。同时,应积极建立持续质量改进制度及措施,发现问题及时处理。
 
  压力蒸汽灭菌和干热灭菌是微生物实验室最常用的灭菌方法,但因这两种方法设备复杂,影响因素较多,使用时一定要经常监测其灭菌效能。采用化学监测方法作为灭菌工作日常监测内容,利用生物监测方法作为灭菌效果的最终质量保障,是目前较为理想、科学、实用的灭菌效能监测的方法。在实际工作中,两者搭配使用既能保障灭菌效果,也能兼顾检验成本和效率。
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